一、背景介绍

1.M13KO7 辅助噬菌体的信息与优势

辅助噬菌体是噬菌体展示技术中不可或缺的核心工具。它是一种自身 DNA 复制效率极低的丝状噬菌体突变型，其基因组具有 M13 噬菌体的所有功能基因，但 IG 区（基因间隔区）是缺陷的，不能被 pⅡ 蛋白识别，因而辅助噬菌体本身 DNA 不能进行单链复制。

辅助噬菌体能为噬菌粒提供 pⅡ 蛋白和包装蛋白，在辅助噬菌体的帮助下，噬菌粒可以顺利地进行 DNA 的复制与噬菌体的包装，完成对宿主的侵染（这一过程通常称为超染）。常用的辅助噬菌体有 VCSM13 和 M13K07。

M13KO7 辅助噬菌体是 gII 基因具有 Met40Ile 突变的 M13 噬菌体，具有来自于 P15A 的复制起点以及来自于 Tn903 的卡那霉素抗性基因，这两个片段插入 M13 的复制起点。M13KO7 能够在缺少噬菌粒 DNA 的情况下进行复制，当存在一个携带有野生型 M13 或 f1 复制起点的噬菌粒时，单链噬菌粒会被优先包装并被分泌到培养基中，因此其常用于噬菌体展示抗体库构建。

M13K07 是目前噬菌体展示技术领域应用最广泛的辅助噬菌体，全球超过 90% 的 scFv/Fab 抗体库和纳米抗体库构建项目使用该产品。作为噬菌体展示系统的核心试剂，M13K07 的质量直接决定了抗体库的库容、多样性和筛选成功率。

2.M13KO7 辅助噬菌体的工作原理

当含有重组基因的噬菌粒转染至大肠杆菌后，再用辅助噬菌体进行超染。辅助噬菌体合成的 pⅡ 蛋白会优先识别噬菌粒上的正常基因间隔区（IG region），启动滚环复制，产生单链 DNA（ssDNA）。

这样所产生的子代噬菌体外壳蛋白所包装的 ssDNA 主要是来自含有重组基因组的噬菌粒的 DNA，并同时展示噬菌粒编码的 pⅢ 或 pⅧ 与外源肽段的融合蛋白和辅助噬菌体编码的野生型 pⅢ 或 pⅧ 蛋白，确保重组噬菌体能正常感染、组装和增殖。

当含有重组 scFv/VHH 基因的噬菌粒转染大肠杆菌后，再用 M13K07 进行超感染：

● M13K07 进入大肠杆菌后，表达复制和包装所需的所有蛋白

● M13K07 编码的 pII 蛋白优先识别噬菌粒上的正常 IG 区，启动滚环复制，产生单链 DNA (ssDNA)

● 噬菌粒的 ssDNA 被包装进噬菌体外壳蛋白中，形成子代噬菌体颗粒

● 每个子代噬菌体颗粒表面展示有 1-5 个融合了抗体分子的 pIII 蛋白，同时内部包裹着对应的噬菌粒 DNA

● M13K07 自身的 DNA 由于 IG 区缺陷，很少被包装，因此子代噬菌体中 90% 以上都是重组噬菌体

二、仁域生物 M13KO7 辅助噬菌体产品优势

仁域生物提供的 M13KO7 辅助噬菌体是经过严格质量控制的高纯度、高滴度产品，适用于所有噬菌体展示抗体库的构建和筛选实验。

1.M13KO7 辅助噬菌体特性：

● 基因型：M13KO7 (Δ(lac-proAB), thi, supE, F'[traD36, proAB+, lacIq, lacZΔM15])

● 抗性：卡那霉素抗性（KanR）

● 复制起点：P15A 复制起点（质粒复制）和缺陷型 M13 复制起点（噬菌体复制）

● 滴度：≥1×10^12 pfu/mL

● 纯度：无细菌、真菌、支原体污染

● 稳定性：4℃可保存 6 个月，-20℃可保存 2 年

2.产品优势：

● 超高滴度：滴度≥1×10^12 pfu/mL，满足大规模抗体库构建需求

● 高包装效率：优先包装噬菌粒 DNA，重组噬菌体比例＞90%

● 批次稳定：严格的生产工艺和质量控制，确保批次间一致性

● 即用型：无需纯化，直接使用，节省实验时间

● 价格合理：提供具有竞争力的价格，降低实验成本

3.质量控制

每一批次的 M13KO7 辅助噬菌体都经过以下严格的质量检测：

● 滴度测定：采用双层琼脂平板法测定滴度，确保≥1×10^12 pfu/mL

● 纯度检测：通过 OD260/OD280 比值测定，确保纯度＞1.8

● 无菌检测：无细菌、真菌、支原体污染

● 功能验证：通过噬菌体展示抗体库构建实验验证包装效率

 三、产品说明