一、背景介绍

1.定义与核心原理

链霉亲和素酶标板是将链霉亲和素 (Streptavidin, SA) 通过共价键或物理吸附方式固定在聚苯乙烯酶标板表面制成的固相载体。其核心原理是利用链霉亲和素与生物素 (Biotin) 之间自然界最强的非共价相互作用，将生物素化的分子 (抗体、抗原、蛋白、核酸等) 高效、特异性地固定在板孔表面，用于后续的免疫检测、蛋白互作分析等实验。

2.链霉亲和素 - 生物素系统的核心优势：

● 超高亲和力：KD 值达 10^-15 M，比抗原 - 抗体相互作用强 1000-10000 倍

● 高特异性：几乎不与其他生物分子发生非特异性结合

● 稳定性好：结合复合物耐受极端 pH、温度和变性剂

● 通用性强：可与任何生物素化的分子结合

● 信号放大：一个链霉亲和素分子可结合 4 个生物素分子，实现信号放大

3.链霉亲和素的类型

根据来源和结构的不同，用于包被酶标板的链霉亲和素主要分为以下几种：

4.包被技术

链霉亲和素在酶标板表面的包被方式主要有以下三种：

● 物理吸附法：利用疏水相互作用将链霉亲和素吸附在聚苯乙烯表面

优势：操作简单、成本低

劣势：结合力弱、易脱落、均一性差

● 共价结合法：通过化学反应将链霉亲和素共价连接到活化的酶标板表面

优势：结合力强、稳定、不易脱落、均一性好

劣势：操作复杂、成本高

● 定向包被法：通过特定的相互作用将链霉亲和素定向固定在板孔表面

优势：结合位点暴露充分、结合能力高、均一性好

劣势：技术复杂、成本高

● 行业趋势：目前高端产品普遍采用共价结合法和定向包被法，以提高结合能力和均一性，降低背景值。

二、产品说明

链霉亲和素包被酶标板是将链霉亲和素（5ug/ml)溶于包被液中对 96 孔酶标板进行包被处理，并后续通过封闭液封闭。本试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

1.物理性能

试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气

2.使用说明

拆开可直接用于各种适用的应用场景适用

3.自备材料

● 生物素标记的抗体（捕获抗体）

● 酶标记或其他信号分子标记的抗体（检测抗体）

脱脂奶粉

● PBS：NaCl、KCl、NaHPO4、KH2PO4

● PBST：NaCl、KCl、NaHPO4、KH2PO4、Tween-20

● TMB 显色液

● 微孔板振荡器

4.操作步骤

● 稀释：用 0.5‰ PBST 将生物素标记抗原稀释至 1 μg/mL；

● 包被结合：向酶标板中加入稀释后的抗体样品，100 μL/孔，37 ℃缓摇孵育1-2 h；

● 洗涤：弃包被液，拍干液体，加入 PBS，200 μL/孔，将酶标板置于微孔板振荡器上振荡 1 min，拍干，洗涤 3 次；

● 封闭：向酶标板中加入 3% 脱脂奶粉-PBS，200 μL/孔，将酶标板置于 37 ℃缓摇孵育 1 h；

● 洗涤：弃封闭液，拍干液体，加入 PBS，200 μL/孔，将酶标板置于微孔板振荡器上振荡 1 min，拍干，洗涤 3 次；

● 一抗结合：加入提前封闭和稀释的一抗，100 μL/孔，37 ℃缓摇孵育 1 h；

● 洗涤：弃液，拍干液体，加入 1‰ PBST，200 μL/孔，将酶标板置于微孔板振荡器上振荡 1 min，拍干，洗涤 5 次；

● 二抗结合：加入提前封闭和稀释的二抗，100 μL/孔，37 ℃缓摇孵育 1 h；

● 洗涤：弃液，拍干液体，加入 1‰ PBST，200 μL /孔，将酶标板置于微孔板振荡器上振荡 1 min，拍干，洗涤 5 次；

● 显色：加入 TMB 显色液，100 μL/孔，37 ℃避光显色 5-10 min；

● 终止：加入 2M HCl，50 μL/孔，终止反应；

● 读数：在酶标仪上读取显色结果。

5.注意事项

● 3% 脱脂奶粉-PBS 需现配现用；

● 显色时间不宜过长；

● 开封后的酶标板需 4 ℃避光干燥保存。

6.储存温度及效期

4℃，可保存一年

7.温馨提示

为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。

8.技术支持

本公司产品使用过程中如有任何疑问与建议，欢迎随时与我们联系。